LETM1 ile transfekte edilen hücrelerde apoptotik belirteçlerin incelenmesi

Abstract

LETM1 hücre için kalsiyum ve potasyum homestazisi, mitokondriyal protein sentezi ve hücre ölümünde rol oynadığı gösterilmiş 83,4 kD ağırlığında mitokondri iç membranında lokalize bir transmembran proteindir. Yakın bir geçmişte yapılan LETM1? in hücre ölümündeki rolüne ilişkin az sayıda çalışma, elde edilen sonuçlar bakımından büyük farklılıklar içermektedir. Bu çalışmanın amacı LETM1 ile transfekte edilen HeLa hücrelerinde hücre canlılığının belirlenmesi ve hücrelerin ölümü halinde sürecin apoptotik olup olmadığını araştırmaktır. Tez, LETM1?in fonksiyonunun aydınlatılmasına yönelik yürüttüğümüz çalışmalar için bir ön çalışma niteliğindedir. Bu amaçla HeLa hücrelerinde pLETM1 transfeksiyonu gerçekleştirilmiş. LETM1 ekspresyonu western blot yöntemi ile tayin edilerek hücre canlılığına etkisi belirli zaman aralıklarında MTS tayini ile incelenmiştir. Elde edilen verilere göre LETM1 ekspresyonu pLETM1 ile transfekte edilen HeLa hücrelerinde başarılı bir şekilde artmaktadır. LETM1' in aşırı ekspresyonu sonucu hücre canlılığının kontrol grubuna göre azaldığı belirlenmiştir. Literatürde LETM1 ekspresyon düzeylerinin hücre canlılığı üzerine etkisine dair veriler çelişkilidir. Tez çalışmamız kapsamında elde edilen veriler aşırı ekspresyonun hücre canlılığını azalttığını göstermektedir.

LETM1 is a 83,4 kDa mitochondrial inner mambrane localized protein which plays an important role in potassium and calcium homeostasis, mitochondrial protein synthesis and cell death. Recent studies on the relationship between LETM1 and cell viability show inconsistent data. The aim of this study is to determine the cell viability in LETM1 transfected HeLa cells and to determine whether cell death is apoptotic in the case of reduction in cell viability. The thesis is a preliminary study for our ongoing research on LETM1 function. For this purpose, HeLa cells; transfected have been with pLETM1. The expression levels of LETM1 are examined by western blotting and cell viability is determined with MTS cell proliferation assay. According to our data, LETM1 expression has successfully increased in HeLa cells transfected with pLETM1. Cell viability significantly decreases in transfected cells when compared to control cells. The current literature about the effects of LETM1 expression on cell viability is inconsistent. Our data clearly indicates that LETM1 over-expression results in a decrease in cell viability.