Fare embriyolarının dondurulmasında melatoninin embriyo canlılığı ve gelişmesi üzerindeki etkilerinin incelenmesi

Abstract

Sunulan bu tez çalışmasının amacı, fare embriyolarının katı yüzey vitrifikasyon (SSV) yöntemi ile dondurulması sonrası, embriyo kültür medyumuna melatonin ilavesinin in vitro gelişim üzerine etkilerinin araştırılmasıdır. Melatonin oosit olgunlaşması ve embriyo gelişimini desteklediği bilinmektedir. Sunulan çalışmada sekiz hücreli fare embriyolarının katı yüzey vitrifikasyon yöntemi ile dondurulması sonrası melatonin ilaveli kültür medyumlarında in vitro gelişimi ve kalitesi araştırılmıştır. Bu amaçla B6CBAF1 ırk fareler, 10 IU PMSG ve 48 saat sonra 10 IU hCG’nin intraperitonal (IP) enjeksiyonu ile süperovule edilmiş ve pronüklear aşamadaki embriyolar elde edilmiştir. KSOM embriyo kültür medyumu + 4mg BSA medyumunda 37°C ve %5 CO? ‘de sekiz hücreli aşamaya kadar inkübe edilmiştir. Sekiz hücreli embriyolar; 37°C, ekilibrasyon solüsyonunda 12 dakika bekletildikten sonra dondurma solüsyonunda yıkanarak 20 saniye içerisinde, sıvı azot içerisinde bulunan alimünyum yüzeye damla halinde bırakılarak (SSV) katı yüzey vitrifikasyon yöntemi ile dondurulmuştur. Çözündürme sonrası elde edilen embriyolar, KSOM medyumu + 4mg BSA medyumunda 37°C ve %5 CO? ‘de blastosist aşamaya kadar inkübe edilmiştir. Deneyde toplam üç grup kullanılmıştır; kontrol, SSV grubu ve SSV + 10 ¯¹² M melatonin, sırasıyla kullanılan embriyo sayıları; 35, 74 ve 70’dir. Embriyoların in vitro gelişim oranları sırasıyla, %97,14, %86,49 ve %92,86 olarak tespit edilmiştir. Diferansiyel boyama sonucu toplam hücre sayıları sırasıyla; 64, 48 ve 33 olarak belirlenmiştir. Elde edilen sonuçlara göre; melatoninin, SSV vitrifikasyon yöntemi ile dondurulan embriyoların in vitro gelişimini desteklediği ilk kez bu çalışmada gösterilmiştir.

The aim of this thesis is to investigate the effects of melatonin addition on embryo culture medium in vitro development after freezing mouse embryos by solid surface vitrification (SSV). It is known that melatonin supports oocyte maturation and embryo development. The purpose of this study is to investigate the in vitro growth and quality of melatonin-supplemented culture medium after freezing the eight-cell mouse embryos by solid surface vitrification. For this purpose, B6CBAF1 mice were superovulated with 10 IU PMSG and intra-peritoneal (IP) injection of 10 IU hCG after 48 hours to obtain embryos in the pronuclear stage (PN) embryos. Afterwards, they were incubated up to eight The aim of the thesis study cell steps under the conditions of 37°C and 5% CO? in KSOM medium + 4mg BSA medium. Eight-cell embryos were kept frozen in solid surface vitrification method (SSV) by first keeping them 12 minutes at 37°C in the equilibration solution (then washing them in freezing solution) and then dropping them to aluminum surface in liquid nitrogen with in 20 seconds. Embryos obtained after distillation were incubated in KSOM + 4mg BSA medium to 37°Cand 5% CO? to blastocyst stage. A total of three groups were used in the experiment: control, SSV group and SSV + 10 ¯¹² M melatonin. Number of embryos used were 35, 74 and 70 respectively. The growth rates of in vitro development were 97,14%, 86,49% and 92,86%, respectively. According to differential staining total cell counts were 64, 48 and 33 respectively. According to the results obtained; this study demonstrates the first time that melatonin supports in vitro development of embryos frozen by SSV vitrification.