Kabakgil Tohumlarında Karpuz Bakteriyel Fide Yanıklığı Ve Meyve Lekesi Hastalığı Etmeni Acidovorax Citrulli’nin Varlığının Belirlenmesinde Kullanılabilecek Uygun Yöntem(Ler)İn Saptanması

Abstract

Karpuz bakteriyel fide yanıklığı ve meyve lekesi hastalığı etmeni Acidovorax citrulli (Ac) tohumla taşınan bir bakteriyel etmendir. Bakteri tohum kabuğunda ve embriyosunda uzun yıllar yaşamını sürdürür. Bu çalışma, tohum kökenli hastalık etmeni Ac’nin tohumda varlığının belirlenmesinde kullanılabilecek en uygun, hızlı ve güvenilir yöntem(ler)in belirlenmesi amacıyla yapılmıştır. Bu amaçla kabakgil tohumları parçalayıcıda parçalanarak homojenize edilmiş, daha sonra sıvı besi yerinde 24 saat orbital çalkalayıcı içinde çalkalanmıştır. Tohumda etmenin aranmasında fidede belirti izleme, tohum çalkalama suyundan genel bir besi yeri olan King B, yarı seçici besi yerleri P-278 ve mEBB’ye ekim ile bakteri izolasyonu yapılmış, tanılama çalışmalarında türe spesifik ELISA ve türe spesifik BIO-PCR yöntemleri kullanılmıştır. Çalışma sonucunda, tohumdan gelişen fidede kotiledon yapraklarda su emmiş alanlar olduğu gözlenmiştir. Ancak tohum çalkalama suyunun genel besi yerine ekimi ile yapılan DAS-ELISA ve PCR testi sonuç vermemiştir. Yarı seçici besi yerlerine ekim ve gelişen bakterilerin toplanarak etmene spesifik PCR testleriyle patojenin varlığı başarılı bir şekilde belirlenmiştir. Geliştirilen bu yöntemle karpuz, karpuz anacı, kavun ve hıyar tohumlarını içeren 22 farklı kabakgil tohum örneği Ac varlığı yönünden incelenmiş ve dört örneğinin (bir hıyar, bir kavun ve iki karpuz) patojenle bulaşık olduğu saptanmıştır. Çalışma sonucunda belirlenen bu BIO-PCR yöntemine göre, kabakgil tohumları fide haline getirilmeden uygun ve hızlı bir şekilde bu patojenin varlığı yönünden incelenebilir.

Watermelon seedling blight and fruit blotch caused by Acidovorax citrulli (Ac) is a seed-borne bacterial disease. The bacterium survives in/on seeds for years. The aim of this study was to determine the most favourable, reliable and fast method for detection Ac from cucurbit seeds. Cucurbit seeds were homogenised using a blender and left in orbital shaker for 24 h in a nutrient broth. The methods seedling grow out, pathogen isolation from seed washing water dilutions onto semi selective media P-278 and mEBB and general medium King B, DAS-ELISA and BIO-PCR were used for detection. Water-soaked lesions observed on cotyledons. Since DAS-ELISA and PCR tests with seed dilutions onto King B has failed to detect Ac from seed lots, Ac specific PCR with dilutions from semi selective media has successfully detect the pathogen. As a result of this study, four (one cucumber, one melon and two watermelon seed lots) out of twenty two tested cucurbit seeds were contaminated with Ac. This study recommended that this BIO-PCR is safe, reliable and fast for detection Ac from cucurbit seeds without any seedling growth.