LETM1 baskılanan fare embriyanik fibroblast hücrelerinde oksidatif fosforilasyon komplekslerinin BN-PAGE yöntemiyle değerlendirilmesi

Abstract

İç mitokondri membranında gerçekleşen iyon ve elektron transportu, ATP sentezi, mitokondriyal membran potansiyeli ve buna benzer birçok biyolojik süreçte rolü olduğu düşünülen Letm1 proteini, 83,5 kDa moleküler ağırlığa sahip olup, mitokondri iç membranında yer almaktadır. Mitokondri iç membranı iyon transportunda rol oynayan proteinlerle birlikte, ATP sentezinde rol oynayan OXPHOS kompleks proteinlerini de içermektedir. Bir bütün olarak bakıldığında iç membran boyunca meydana gelen iyon alış-verişi ve OXPHOS protein komplekslerinin ATP üretimi olayları birbiri ile ilgilidir. Literatürde Letm1 proteininin kompleks yapılar üzerindeki etkisinin, mitokondriyal fonksiyon bozuklukları ve değişimleri ile karakterize olan kanser hücre hatlarında gerçekleştirildiği az sayıda çalışma vardır. Ancak elde edilen sonuçlar çelişkilidir. Bu çalışmanın amacı ise immortalize fare embriyonik fibroblast hücreleri (MEF) kullanılarak, LETM1 ifadesi baskılandığında OXPHOS kompleks proteinlerinin ifadelerindeki değişimin analiz edilmesidir. Bu amaçla LETM1 ifadesi baskılandığında, OXPHOS kompleks protein ifadelerindeki değişim SDS-PAGE ve BN-PAGE teknikleri kullanılarak analiz edilmiştir. Çalışma sonucunda kullanılan iki farklı teknik sonucunda MEF hücrelerinde kompleks I, III ve IV’ün protein ifadelerinde anlamlı bir değişikliğin olmadığı gösterilmiştir

Letm1 protein which is thought to have a role on in many biological processes such as ion and electron transport, ATP synthesis, and mitochondrial membrane potential, has a molecular weight of 83,5 kDa and is located inside the mitochondrial inner membrane. The mitochondrial inner membrane contains proteins that play a role in the ATP synthesis, as well as proteins that play a role in ion transport. Taken as a whole, ion transport through the inner membrane and ATP synthesis from OXPHOS complexes, are related to each other. There are few studies in the literature where the effect of the Letm1 protein on complex structures is carried out in cancer cell lines characterized by mitochondrial dysfunctions and alterations. But the results are contradictory. The aim of this study is to analyze the expression of OXPHOS complex proteins by immortalized mouse embryonic fibroblast cells (MEF) when LETM1 expression is suppressed. For this purpose, the expression level of OXPHOS complex proteins were analyzed using SDS-PAGE and BN-PAGE techniques after LETM1 suppression. As a result of this study, it has been shown that there is no significant change in level of complexes I, III and IV when used two different techniques in MEF cells