Covıd-19 tedavisinde kullanılan ilaçların insan böbrek hücre hattı üzerine etkilerinin in vitro değerlendirilmesi

Abstract

COVID-19 olarak adlandırılan ve 2019 yılı itibari ile tüm dünyayı etkileyen SARS-CoV-2"ye karşı özgül bir tedavinin bulunmaması, hali hazırda başka hastalıkların tedavisinde kullanılan bazı ilaçların kullanılmasını gündeme getirmiştir. Bu ilaçlardan hidroksiklorokin (HCQ), favipiravir (FVP) ve valproik asit (VPA) pandemi sırasında sıklıkla ve yüksek dozlarda reçete edilmiştir. Bu Yüksek Lisans Tez çalışmasında HEK293T hücrelerinde HCQ, FVP ve VPA uygulanmalarının hücre canlılığı, çoğalması ve morfolojisi üzerine etkileri MTT analizi ve AO/PI boyamaları kullanılarak, HDAC aktivitesindeki değişim ve bu değişimin anti-inflamatuar yanıt belirteçleri olan IL-6, IL-10 ve TNF-? ifadesine etkisi ELİSA yöntemi kullanılarak değerlendirilmiştir. VPA, HCQ ve FVP uygulanan kültürlerde hücre canlılığının devam ettiği herhangi bir hücre ölümü olmadığı gözlenmiştir. Yapılan MTT analizleri sonucunda VPA uygulanan kültürlerde hücre proliferasyonunun 24. ve 48. saatte ve HCQ uygulanan kültürlerde 48. saatte azaldığı, FVP uygulanan kültürlerde ise 24. saatte hücre proliferasyonunun azaldığı fakat 48. saatte tekrar artmış olduğu gözlenmiştir. Tüm deney gruplarında HDAC aktivitesinin artmış olduğu belirlenmiştir. VPA uygulanan kültürlerde 24. saatte %20,42 ve 48. saatte %5,77, HCQ uygulanan kültürlerde 24. saatte % 53,16 ve 48. saate %54,43 ve FVP uygulanan kültürlerde 24. saatte %164,22 ve 48. saatte % 198,16 artış gerçekleşmiştir. HCQ IL-10 ifadesinde artışa, FVP IL-10 ve IL-6 seviyesinde artışa ve VPA uygulaması özellikle TNF-? ifadesinde artışa neden olmuştur. Sonuç olarak HDAC aktivitesindeki artışın IL-10, IL-6 ve TNF-? değişimlerine neden olduğu, VPA uygulamasının TNF-? üzerindeki etkisinin HDAC ile ilişkili olabileceği ancak IL-10 ve IL-6 ifadesinden bağımsız farklı bir hücresel yolak ile ilişkili olabileceği gösterilmiş ve literatürde henüz yer almayan önemli bulgular raporlanmıştır.

The lack of a specific treatment for SARS-CoV-2, which is called COVID-19 has rapidly affected the whole world as of 2019, has brought the use of some drugs currently used in the treatment of other diseases. Of these drugs, hydroxychloroquine (HCQ), favipiravir (FVP) and valproic acid (VPA) have been prescribed frequently and in high doses during the pandemic. In this Master's Thesis study, the effects of HCQ, FVP and VPA applications on cell viability, proliferation and cell morphology in HEK293T cells were determined by using MTT analysis and AO/PI staining, and the change in HDAC activity and the anti-inflammatory response markers of this change, IL-6, IL-10 and its effect on TNF-? expression was evaluated using the ELISA method. In all cultures treated with VPA, HCQ and FVP, it was observed that cell viability was maintained and no cell death was observed. As a result of MTT analysis, it was observed that cell proliferation decreased at 24 and 48 hours in cultures treated with VPA and at 48 hours in cultures treated with HCQ, while cell proliferation decreased at 24 hours in cultures treated with FVP, but increased again at 48 hours. It was determined that HDAC activity was increased in all experimental groups compared to control; 20.42% at 24 hours and 5.77% at 48 hours in cultures treated with VPA, 53.16% at 24 hours and 54.43% at 48 hours in cultures treated with HCQ, and 164.22% at 24 hours and 198,16% at 48 hours in cultures treated with FVP. HCQ caused an increase in IL-10 expression, FVP caused an increase in IL-10 and IL-6 levels, and VPA administration especially increased TNF-? expression. As a result, it has been shown that the increase in HDAC activity causes changes in IL-10, IL-6 and TNF-?, the effect of VPA administration on TNF-? may be related to HDAC, but may be related to a different cellular pathway independent of IL-10 and IL-6 expression and important findings that have not yet been reported in the literature have been reported.