Hastalık belirteci bir proteine karşı monoklonal antikor geliştirilmesi ve karakterizasyonu: model çalışma

Abstract

Sunulan bu tez çalışmasının amacı model olarak seçilen bir hastalık belirteci proteine karşı yüksek afiniteli monoklonal antikor geliştirilmesi, antikorun geniş ölçekte üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonudur. Bu amaçla kistik fibrozisde hastalık belirteci olan PAP (Pankreatit ile İlişkili Protein)’a karşı monoklonal antikor geliştirmek amacıyla 6/8 haftalık toplam 10 fare intraperitonal enjeksiyon ile immunize edilmiştir. ELISA testi ile bağışıklık yanıtları belirlenen farelerin dalak hücreleri ile myeloma hücrelerinin hibridizasyonu yapılmış, elde edilmiş antikorların karakterizasyon çalışmaları yapılmıştır. Çalışmada kullanılan 10 fareden 3’ünde diğerlerine göre daha yüksek immun yanıt oluştuğu belirlenmiş, bunlardan biri ile yapılan füzyon çalışması sonucu antikor aktivitesine sahip 32 hibrit klon elde edilmiştir. Tekrarlanan ELISA kontrol çalışmalarında antikor aktivitesine sahip hücrelerin %25’i PAP antijenine karşı spesifik antikor yanıtı vermiş ve bunlarında %50’si bu yanıtı sürdürmüştür. Sonuç olarak bu hücrelerden 4 hybridoma hücresinin daha sonra tanı kiti geliştirmek amacıyla kullanılabilecek yüksek duyarlılıkta monoklonal antikor ürettiği belirlenmiştir. Elde edilen antikorlar özgüllük, afinite, altizotip olarak değerlendirilmiş 4 antikorun her birinin özgül olduğu iki antikorun afinitesinin daha yüksek olduğu görülmüş ve elde edilen 4 antikor da saflaştırılmıştır. Bu tez çalışması gelecekte hayvan hastalıklarının tanısı veya daha başka sebeplerle farklı proteinlerin tespitine yönelik antikorların üretim çalışmaları için önemli bir kaynak oluşturacaktır.

In this study, the production of monoclonal antibody against a disease marker selected as a targeted model, the characterization, large-scale production and purification of the produced antibodies are intended to work. For this purpose, Pancreatitis - associated protein which is a Cystic fibrosis marker used as an antigen were intraperitoneally injected to 6-8 weeks old 10 Balb/C mice at specific doses and time intervals. The antibody titers of mice were determined by indirect ELISA, and the best immune response in mice was selected for the fusion. The fusion was carried out using the mouse spleen cell and the F0 myeloma cells in the presence of polyethylene glycol (PEG). A higher immunoreactivity was detected in 3 of 10 mice used in the study. Fusion study with one of these resulted 32 hybrid clones with antibody activity. In repeated ELISA control studies, 25% of the cells with antibody activity gave a specific antibody response to the PAP antigen and 50% of them maintained this response. As a result, it has been determined that four hybridoma cells from these cells produce monoclonal antibody with high sensitivity which can be used later to develop a diagnostic kit. The obtained monoclonal antibodies were found to have a high specificity, the immunoglobulin type and the light chain type of the obtained monoclonal antibodies were determined as IgG1 and ? (kappa), respectively. Monoclonal antibodies were characterized in terms of their affinities and 2 of the fourth antibodies were found to have a high affinity. This thesis study will be an important source for future studies of the production and characterization of antibodies for the detection of animal diseases or detection of proteins for different purposes.